熒光顯微鏡的幾種熒光光源

熒光顯微鏡是細(xì)胞生物學(xué)的基本工具。它是由光源、濾色片和光學(xué)系統(tǒng)等主要部件組成。是利用一定波長(zhǎng)的光激發(fā)標(biāo)本發(fā)射熒光，通過(guò)物鏡和目鏡系統(tǒng)放大觀察標(biāo)本的熒光圖像而實(shí)現(xiàn)對(duì)熒光樣品的定性定量研究。

激發(fā)、濾光、成像、淬滅，熒光實(shí)驗(yàn)的調(diào)整就是怎么才能協(xié)調(diào)好以上因素得到理想的效果，一個(gè)常被忽視的方面是光源的使用，熒光顯微鏡的常用光源都是白光光源：高壓汞燈和氙燈，現(xiàn)在還新出了金屬鹵素?zé)艉蚅ED。

1、汞燈

超高壓汞燈（50-200W），它是用石英玻璃制作，中間呈球形，內(nèi)充一定數(shù)量的汞，工作時(shí)由兩個(gè)電極間放電，引起水銀蒸發(fā)，球內(nèi)氣壓迅速升高，當(dāng)水銀*蒸發(fā)時(shí)，可達(dá)50～70個(gè)標(biāo)準(zhǔn)大氣壓力，這一過(guò)程一般約需5～15min。超高壓汞燈的發(fā)光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過(guò)程中發(fā)射光量子的結(jié)果。它發(fā)射很強(qiáng)的紫外和藍(lán)紫光，足以激發(fā)各類(lèi)熒光物質(zhì)，因此，為熒光顯微鏡普遍采用。

推薦產(chǎn)品：歐司朗50W，103W，200W汞燈，適用于各大廠家熒光顯微鏡；一般200小時(shí)壽命，長(zhǎng)400小時(shí)。

2、氙燈

氙燈和汞燈做為白光源，都能提供從紫外到近紅外一系列波長(zhǎng)的光，但它們卻有著不同的激發(fā)光譜。汞燈集中在近紫外、藍(lán)光以及綠光附近，這種在峰值的高激發(fā)能量確保產(chǎn)生明亮的熒光信號(hào)，但光毒性卻很強(qiáng)。因此，HBO用來(lái)對(duì)固定樣品或弱熒光成像。相比而言，氙燈光源的激發(fā)比較平緩，可以用于不同波長(zhǎng)間強(qiáng)度的比較，例如用于鈣離子濃度測(cè)量等。氙燈的強(qiáng)激發(fā)在近紅外800-1000nm。

XBO較HBO的特點(diǎn)：

1）光譜強(qiáng)度更均勻

2）在紅外及中紅外仍有較強(qiáng)光譜強(qiáng)度

3）能量較強(qiáng)更易到達(dá)物鏡后孔徑

推薦產(chǎn)品：XBO75W，100W氙燈；壽命一般400小時(shí)，1200小時(shí)

3、金屬鹵素?zé)?/span>

這是近年來(lái)出現(xiàn)的一種光源，它和汞燈的激發(fā)光譜很像，但它和顯微鏡以光纖相連，能散熱，壽命更長(zhǎng)。光纖從光源連到顯微鏡上，可以大量減少光產(chǎn)生的熱能。金屬鹵素?zé)魧?duì)活細(xì)胞成像的另一個(gè)優(yōu)勢(shì)是內(nèi)置強(qiáng)度設(shè)計(jì)裝置，可以容易調(diào)節(jié)激發(fā)光。

推薦產(chǎn)品：EXPO公司X-cite光源，120W，適用于各大廠家熒光顯微鏡；壽命2500小時(shí)以上。

4、近來(lái)，還出現(xiàn)了一種新的熒光光源：LED，這種光源的開(kāi)關(guān)在毫秒間，減少樣品在光照下的暴露時(shí)間，延長(zhǎng)壽命。另外，LED光的衰減即快又，長(zhǎng)期活細(xì)胞試驗(yàn)下可大大減少光毒性。和白光相比，LED僅僅在一個(gè)較窄的光譜激發(fā)，多個(gè)LED波段使得LED光源能為多色熒光提供應(yīng)用。